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体外和体内CRISPR文库筛选

CRISPR/Cas9为基础的体外文库筛选

 

  • 个性化定制CRISPR文库和实验设计
  • sgRNA的合成、克隆构建以及文库质控
  • 对质粒文库进行病毒包装和细胞系感染
  • 进行特定的筛选(正筛选或者负筛选)
  • 通过二代测序和数据分析比较筛选前后sgRNA丰度变化确定可能的靶标
  • 在细胞中结合其他例如基于慢病毒的基因过表达或者敲低,进行靶标验证

 

 

 

体内的靶标鉴定与验证

 

  • 定制CRISPR文库,扩增相应的感染细胞(肿瘤细胞或T细胞)
  • 体内筛选后,分离肿瘤细胞或T细胞进行二代测序

 

 

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